云南师大附中(师范大学附属中学)2023届高考适应性月考卷(四)4语文试题答案
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【答案】(I)限制neo'基因基因X的内部和neo'基因的两端产生相同的黏性末端，便于被DNA连接酶连接(2)发育的全能性显微注射在培养基中加入新霉素和DHPG,培养导入置换载体的细胞未成功导入的ES细胞中不含n0'基因，不抗新霉素，所以在培养基中无法存活：成功导入但发生非同源重组的ES细胞中，HSV-k基因可以表达，其产物会将培养基中的DHPG转化为有毒物质从而杀死ES细胞；只有发生同源重组的细胞，含有neo'基因，同时无HISV-tk基因，可以在培养基中存活(3)受体对外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应【解析】(1)在制备置换载体时，要将no'基因（新霉素抗性基因）作为置换基因X的插入突变，因此在构建基因X的置换载体时，需用相同的限制酶处理基因X和neo'基因，使它们形成相同的黏性末端。由图可知，no'基因需要插入到基因X的内部，并且在no'基因外侧添加HSV-tk基因，所以该酶的酶切位点应位于基因X的内部和no'基因的两端，该过程中用相同限制酶切割的目的是获得相同的黏性末端，便于被DNA连接酶连接。(2)ES细胞具有发育的全能性。基因表达载体导入动物细胞时常用显微注射技术，导入后的ES细胞需要进行筛选，此时存在三种类型的细胞：未成功导入的ES细胞、成功导入但发生了非同源重组的细胞、成功导入发生同源重组的细胞。在未成功导入置换载体的ES细胞中，不含有neo'基因，不抗新露素，根据neo'基因和HSV-k基因的作用可知，若培养基中添加新霉素，此种细胞不能存活；若成功导入但发生非同源重组，根据图乙可知，HSV-t基因可以正常表达，所以在培养基中加入DHPG后，HSV-t快基因的表达产物会将DHPG转化为有毒物质杀死ES细胞，此种细胞不能存活；而发生同源重组的ES细胞中，不再含有HSV-h基因，所以在此培养基上能正常生存。因此要将发生同源重组的ES细胞（培养导入置换载体的ES细胞）筛选出来，可以在培养基中加入新霉素和DHPG。(3)将嵌合体胚胎移植到受体小鼠体内并能在受体小鼠体内存活的原因实际上就是胚胎移植成功的原理，即受体子宫对移入的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应。中
【答案】(1)蛋白特异性受体（或系统素受体）(2)逆转录（或反转录）Bam HI和SacI农杆菌染色体DNA植物组织培养(3)分子杂交①均能够在转基因烟草中准确表达出相应的蛋白酶抑制剂且均具有活性②高与内含子有关（或内含子具有增强基因表达活性的作用）(4)已有药物可能会在使用一段时间后导致害虫出现抗药性；蛋白酶抑制剂可防止环境污染；蛋白酶抑制剂对人畜无副作用：蛋白酶抑制剂不易使害虫产生耐受性等（任选1点）【解析】(1)蛋白酶可将200个氨基酸组成的原系统素水解成含18个氨基酸分子的系统素；释放出的系统素作为一种信息分子，应与邻近细胞膜上的系统素受体特异性结合，从而发挥作用。(2)以受伤番茄植株叶片总RNA为模板获取cDNA编码序列，即以RNA为模板获得DNA,方法是逆转录；为保证基因结构的完整性和目的基因正常表达所需要的启动子和终止子，需用限制酶BamH I和SacI切割目的基因和质粒，进而构建出重组质粒；一般情况下，利用农杆菌转化法，将目的基因导入烟草细胞；在农杆菌转化法中，将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA,利用T-DNA可整合到受体细胞染色体DNA上的特点，将目的基因转移到受体细胞的染色体DNA上；转基因受体细胞需通过植物组织培养技术，才能培育成转基因烟草植株。(3)检测目的基因是否成功转录利用的是分子杂交技术，让探针与转录出的mRNA结合。①根据实验一中图1和图2可知，当烟草叶片蛋白提取物用量达25ug时，转ti2烟草植株和转tin2i烟草植株的反应混合物中，剩余胰蛋白酶活性分别为0.7和0.5，和对照植物相比，两种转基因植物剩余的胰蛋白酶活性均下降，说明in2和i2:均能够在转基因烟草中准确表达出具有相应活性的蛋白酶抑制剂，抑制了蛋白酶的活性，导致胰蛋白酶的活性下降。②根据实验二表中结果可知，转tin2i的幼虫平均死亡率比转tin2的高，推测转tin2i烟草植株的杀虫活性比转tin2烟草植株高：综合实验一、二的全部数据可知，tin2i是含有内含子的，出现转tin2i烟草植株的杀虫活性高于转tin2烟草植株的原因可能是与tin2i中内含子有关（或其内含子具有增强基因表达活性的作用)。(4)因为已有药物可能会在使用一段时间后导致害虫出现抗药性，但蛋白酶抑制剂可防止环境污染，对人畜无副作用，不易使害虫产生耐受性，故研制蛋白酶抑制剂这类新型药物具有重要意义。
